一
前言
低髓鞘化脑白质营养不良（Hypomyelinatingleukodystrophies，HLDs）是一种罕见疾病，MRI表现为脑髓鞘发育不全，其特征是1-岁儿童至少相隔6个月进行MRI扫描时，髓鞘缺乏形态不变。HLDs在基因和临床上具有异质性，但存在一个典型共性，即运动能力在大多数HLDs患者中受到影响，通常表现为共济失调伴小脑症状。此外，还可观察到不同程度的智力障碍。HLD1既往名称为Pelizaeus-Merzbacher病（PMD[MIM:]），这是由于髓鞘蛋白-蛋白脂类蛋白1（PLP1[MIM:]）的变异引起的。在该研究开始之前，已在OMIM中定义了15个与HLDs相关的致病基因。
近日医院儿科王静敏团队与美国密西根大学分子行为神经科学研究院MargitBurmeister团队合作研究不明原因HLD患者，并通过全外显子组测序（WES）揭示其遗传病因。该研究基于前期05个病例进行PLP1重复及Panel包（个已知脑白质营养不良相关基因）检测后对50例仍为阴性的病例挑选入组0例进行trio-WES，分析与HLDs相关的已知基因和候选基因变异。0例患儿均根据MRI髓鞘发育不全和运动能力受损诊断为HLDs。通过WES，在0例患儿中的11例患儿发现7个基因，包括TUBB4A、POLR1C、POLR3A、SOX10、TMEMB、DEGS1和TMEM63A中检测到15个致病变异，最后3个基因为近期新发现。在15个变异中，有6个是新变异。通过minigene技术进行剪切实验，剪切变异POLR3A基因c.+5?GC被证明破坏了内含子13的正常剪切，并导致位氨基酸提前终止密码子（p.（PVfs*8））。该研究分析并确定了11例HLDs患者分子诊断，并强调HLDs的遗传异质性及基于trio-WES对HLDs诊断能力。此外，在TUBB4A、POLR3A和POLR1C中发现的新变异拓展了这类基因的突变谱。
二
研究对象
该研究中的0个家系病例来医院收集的05例临床诊断为HLDs队列的一部分，在05例家系中，通过对已知的13个HLDs基因Panel包识别75.6%的致病变异（例阳性患者研究已发表）。对于剩余50个诊断仍未阴性的家系作为本次研究的入组对象。
前期应用MLPA技术排除PLP1基因重复变异（PLP1是HLD1最常见病因）以及个脑白质营养不良相关基因Panel包，由北京康旭医学检验所提供测序。
三
WES测序
由SeqCapEZMedExomeKit和SureSelectHumanAllExonV6捕获全外显子，北京智因东方转化医学研究中心公司和上海明码基因公司在IlluminaX10上提供测序服务，使用Burrows-Wheeler将reads与UCSC人类参考基因组（hg19）进行比对，并通过GATK软件v3.7调用变异并进行注释。对于剪接变异，两种不同的预测工具软件（HSF，